Исследование новых линий мышей, полученных в SPF-статусе на генетической основе C57/Bl6, для изучения молекулярных механизмов патологического воспаления
31.10.2019-25.12.2020
1. Проведено исследование SРF-статуса двух трансгенных линий мышей послередеривации методом серологической ИФА-диагностики. Сформированы пары мышей производителей, несущих трансген, получены пометы и изучена выживаемость трансгенных мышей в пометах с расщеплением по генотипам.
2. Проведено возвратное скрещивание с линией C57Bl/6 с целью перевода
трансгенных линий мышей со смешанной на чистую генетическую основу C57Bl/6 для дальнейшего иммунофенотипирования.
3. Отработаны протоколы генотипирования, позволяющие однозначно интерпретировать генотип Nef-tg+ и IL-6-tg+ у мышей, а также наличие или отсутствие вставки, кодирующей Сrе-рекомбиназу, с целью дальнейшего изучения иммунного статуса трансгенных мышей в сравнении с контрольными мышами из того же помета.
4. Получены образцы геномной ДНК для определения нуклеотидной последовательности трансгена и последующего геномного секвенирования с целью оценки места встраивания и копийности трансгена у независимых линий трансгенных мышей.
5. Изучено процентное содержание основных популяций лимфоидных, миелоидных клеток и эритроцитов у мышей разного генотипа, установленного на основании результатов генотипирования трансгенных линий.
6. Изучена экспрессия флуоресцентного белка EGFP в миелоидных клетках, выделенных из крови или селезенки, или полученных в ходе дифференцировки стволовых
- кроветворных клеток костного мозга, при помощи проточной цитофлуориметрии у мышей
с разным генотипом, установленным по результатам генотипирования трансгенных линий
мышей.
7. Сопоставлены генотипы мышей трансгенных линий, и исследованы ключевые провоспалительные цитокины методом ИФА.
Работы выполнены полностью и в срок. Заказчик по объему, качеству и сроку выполнения работ претензий не имеет.